產品名稱：Pharmingen Transcription Factor Buffer Set

產品貨號：562574

產品說明：
應用: 細胞內染色（流式細胞儀）（常規(guī)測試） 

產品介紹：

BD Pharmingen™轉錄因子緩沖液套裝優(yōu)化用于在免疫熒光染色和表達特定胞質內和核內蛋白的細胞的流式細胞術分析之前固定和透化細胞。BD Pharmingen™轉錄因子緩沖液組旨在提高易用性和小化處理時間，減少非特異性染色，提高陽性染色細胞的分辨率，并顯著減少固定，透化和染色過程中的細胞損失。使用BD Pharmingen TM轉錄因子緩沖液組改善了已知在各種細胞內區(qū)室內表達的許多蛋白質，尤其是轉錄因子的流式細胞術檢測。已發(fā)現(xiàn)該緩沖系統(tǒng)可用于固定和透化來自不同人和小鼠組織的各種細胞類型。緩沖系統(tǒng)可靈活地支持多孔板高通量和大量樣品分析以及需要隔夜樣品存儲的應用。緩沖系統(tǒng)對加工細胞的光散射和自發(fā)熒光特性的影響小，導致與新鮮制備的，高度存活的原代細胞所觀察到的特征相似的特征。在許多情況下，發(fā)現(xiàn)緩沖系統(tǒng)在細胞固定和透化之前和之后都與細胞表面抗原的免疫熒光染色相容。緩沖系統(tǒng)還與許多串聯(lián)熒光染料兼容。緩沖系統(tǒng)可靈活地支持多孔板高通量和大量樣品分析以及需要隔夜樣品存儲的應用。緩沖系統(tǒng)對加工細胞的光散射和自發(fā)熒光特性的影響小，導致與新鮮制備的，高度存活的原代細胞所觀察到的特征相似的特征。在許多情況下，發(fā)現(xiàn)緩沖系統(tǒng)在細胞固定和透化之前和之后都與細胞表面抗原的免疫熒光染色相容。緩沖系統(tǒng)還與許多串聯(lián)熒光染料兼容。緩沖系統(tǒng)可靈活地支持多孔板高通量和大量樣品分析以及需要隔夜樣品存儲的應用。緩沖系統(tǒng)對加工細胞的光散射和自發(fā)熒光特性的影響小，導致與新鮮制備的，高度存活的原代細胞所觀察到的特征相似的特征。在許多情況下，發(fā)現(xiàn)緩沖系統(tǒng)在細胞固定和透化之前和之后都與細胞表面抗原的免疫熒光染色相容。緩沖系統(tǒng)還與許多串聯(lián)熒光染料兼容。緩沖系統(tǒng)對加工細胞的光散射和自發(fā)熒光特性的影響小，導致與新鮮制備的，高度存活的原代細胞所觀察到的特征相似的特征。在許多情況下，發(fā)現(xiàn)緩沖系統(tǒng)在細胞固定和透化之前和之后都與細胞表面抗原的免疫熒光染色相容。緩沖系統(tǒng)還與許多串聯(lián)熒光染料兼容。緩沖系統(tǒng)對加工細胞的光散射和自發(fā)熒光特性的影響小，導致與新鮮制備的，高度存活的原代細胞所觀察到的特征相似的特征。在許多情況下，發(fā)現(xiàn)緩沖系統(tǒng)在細胞固定和透化之前和之后都與細胞表面抗原的免疫熒光染色相容。緩沖系統(tǒng)還與許多串聯(lián)熒光染料兼容。

細胞內染色方案

1.固定：細胞表面染色程序完成后，吸出殘留的染色緩沖液并通過短暫渦旋松開細胞沉淀。向每個管中加入1mL新鮮制備的1x Fix / Perm緩沖液工作溶液，并通過渦旋振蕩約3秒重懸細胞沉淀。將樣品在2-8°C孵育40-50分鐘，避光。

2洗滌：將1ml 1x Perm /洗滌緩沖液直接加入懸浮在1x Fix / Perm緩沖液中的固定和透化細胞中。離心沉淀細胞。（注意：Fix / Perm后的所有離心步驟均為350 g ，在2-8°C下進行6分鐘）。傾倒或吸出上清液。

3.洗滌：向沉淀的細胞中加入2ml 1x Perm /洗滌緩沖液，然后離心。傾析或吸出洗滌緩沖液。

4.細胞內染色：向細胞樣品中加入80-100μl的1x Perm / Wash Buffer和對細胞內蛋白質特異的熒光抗體（如FoxP3，T-bet和/或IL-17A）和非特異性對照染色（例如，匹配熒光Ig同種型對照）到每個管。渦旋管或支架10秒鐘，在2-8°C溫育40-50分鐘，避光。

5洗滌：在洗滌之前簡單地渦旋樣品。用2ml 1x Perm /洗滌緩沖液洗滌細胞。離心細胞。傾倒或吸出洗滌緩沖液。

6.洗滌：用2ml 1x Perm / Wash洗滌細胞。離心細胞。傾析或吸出洗滌緩沖液。

7.用于流式細胞術的樣品制備：將細胞沉淀重懸于350μl流式細胞術染色緩沖液中。使用流式細胞儀分析細胞并獲取數(shù)據(jù)。

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